利用植物组织培养大量繁殖种苗,在兰花中的应用最早。
种子繁殖时,从种子萌发到开花需要6-7年。如果从亲本植株获得相同的材料,进行分株等无性繁殖,就会缩短开花期。
随着植物组织培养技术的开发,从茎尖取出到开花株只要4年左右时间,并且在短期内得到大量繁殖。
下面介绍蕙兰组培培养大量繁殖的操作顺序。
1、母株的选择
选择花和叶片的形态、颜色、株形、生长发育状态良好的植株。
2、采芽
使用茎尖作为组织培养外植体时,取新叶尚未展开、正在伸长的新芽。
这是因为随着蕙兰苗生长,生长点附近的分裂组织的活性会慢慢减弱。另外,随着叶片的展开,杂菌容易进入新芽内部,从而造成接种后污染严重。
3、茎尖的摘出
(1)蕙兰的叶片包住茎部分,且茎比较短。叶片基部的柔软部分,尽量不要留在茎上,一边用解剖刀的先端切开叶片基部,一边小心地从外向里一片一片地剥去叶片。
(2)茎尖外植体的大小为了获得脱病毒植株,取茎尖0.5mm以下为好:从脱毒植株进行大量繁殖时,取茎尖1mm-2mm为好。
4、培养基
(1)从茎尖获得原球茎(PLB)的初代培养基可采用京都培养基(Hyponex)、KnudsonC(KC)、1/2MS培养基,不添加6-苄基嘌吟(BA)、激动素(KT)、萘乙酸(NAA)、吲哚丁酸(1BA)等植物生长调节剂。
(2)原球茎(PLB)增殖培养基中,添加NAA1mg/L。
5、培养
(1)摘出的茎尖接种后放置在培养室中,温度23℃,光照强度1500lxz,每天光照时间为12-16小时,1个月左右开始形成原球茎(PLB)。
(2)形成的原球茎(PLB)继代培养在液体增殖培养基中,进行振荡培养,在液体培养基中的原球茎(PLB)不断地增殖。
(3)最初培养时的增殖率较低,培养1个月左右后再添加新鲜的液体增殖培养基,这样培养1个月可增殖6-7倍。
原球茎(PLB)增殖培养也可以采用固体培养基。
(4)在培养基更新时,充分生长的原球茎(PLB)可转入茎叶分化的培养基中;幼嫩的原球茎(PLB)继续返回到增殖培养基中。
(5)培养不久原球茎(PLB)的绿色会不断加深,变成全部浓绿时,毛根发生,也从底部开始分化出根。
(6)当苗长大后,可进行驯化移栽。
6、病毒检测
侵染蕙兰的病毒有建兰花叶病毒(Cymbiummosaicvirus:CyMV)、齿兰环斑病毒(Odom-toglossumHngspotvirua:ORSV)、兰花斑点病毒(Orch idfleckvirus:OFV)、建兰温和斑驳病毒(Cymb idiummildmottIevirusCyMMV)。
病毒的传染途径有:分株时使用的剪刀、竹压刀、小刀等,还有蚜虫、螨虫等传播。
