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组织培养的培养技术

1、取材植物体的各个部位皆可培表,但根据需要培养的难易,对不同植物则有所区别。茎尖是利用最多的部位。根据不同的需要还可取叶片、花、花梗或花梗腋芽、根、茎等。通常应改初生幼嫩的材料,其分生能力强。

2、消毒

组织培养用的材料大多取自田间,带有大量杂菌,这是无菌培养的大障碍,为此,需严治地进行消毒灭菌。取材后先将泥土洗净,再在自来水中冲洗10~2O分钟,然后转入无菌条件(超净台或接种箱内)进行消毒(见表)。

3、接种培养

接种的培养材料在消毒滤纸上切成所需大小,通常约几毫米大小,中国兰花茎尖应在0.2毫米以下,为此,需在解剖镜下操作。工具用完即应在95%洒精中沾一下,然后用火焰消毒法消毒,避免工具带菌造成交叉污染。材料接种后将培养瓶移入培养室,放在培养架上进行培养。

┌────┬─────────────────────────────┬──────┐

│组织│消毒顺序│备注│

│├──────────┬─────────┬────────┤│

││消毒前│消毒│消毒后││

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│种子│纯酒精中浸10分│10%次氯酸钙浸│九菌水洗3次,在│用幼根或幼芽│

││钟,再用无菌水漂│20~30分钟,再用│无菌水中发芽。或│来产生愈伤组│

││洗│1%溴水浸5分钟│用无菌水洗5次。│织│

││││在滤纸上发芽││

├────┼──────────┼─────────┼────────┼──────┤

│果实│饨酒精迅速漂洗│2%次氯酸钠浸10│无菌水反复冲洗,│获得无菌苗│

│││分钟│再剖除种子或内部││

││││组织││

├────┼──────────┼─────────┼────────┼──────┤

│茎切段│自来水洗净,再用│2%次氯酸钠浸15│无菌水洗3次│直立在琼脂培│

││沌酒精漂洗│一30分钟││养基上或切取│

│││││出组织进行培│

│││││养│

├────┼──────────┼─────────┼────────┼──────┤

│贮藏器官│自来水洗净│2%次氯酸钠浸20│无菌水洗3次、滤│从消毒材料向│

│││~30分钟│纸吸干│都取出组织来│

│││││培养│

├────┼──────────┼─────────┼────────┼──────┤

│叶片│自来水洗净,吸干,│0.1%氯比汞浸1│无菌水反复冲洗,│选用嫩叶,叶│

││再用纯酒精漂洗│分钟或2%次氯酸│滤纸吸干│片平放在琼脂│

│││钠浸15一20分钟││上,或叶片插│

│││││在琼脂中│

└────┴──────────┴─────────┴────────┴──────┘

(王怀宇)

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